多肽相关的常识

来源:康明永瑞  时间:2024-05-10 14:01:08  已阅:0

       我们都知道多肽是α-氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物,是蛋白质水解的中间产物。通常由两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做二肽,同理类推还有三肽、四肽、五肽等。由三个或三个以上氨基酸分子组成的肽叫多肽。多肽能够广泛的应用在生命科学、医学、药学、化学、材料科学等领域。一些需要多肽定制合成服务的朋友可能会对以下几个问题比较关注,我们一起来盘点一下。

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1.什么是多肽的净含量(肽含量),它的意义是什么?

       干品多肽的重量中不仅仅包含多肽,还包含有一些非肽的组份,如水,被吸收的溶剂、配位离子和盐等。肽的净含量是指肽在其中的重量百分比,这个百分比的数值范围很大,可能从50%到90%,取决于纯度、序列以及合成和纯化的方法,不要将肽的净含量和肽的纯度混为一谈,它们是完全不同的两个概念。纯度通常是由HPLC决定的。纯度定义的是多肽样品中含正确序列的组分的百分比,而肽的净含量是指样品中肽类物质相对于非肽类物质所占的百分比,肽的净含量通常是用氨基酸组分分析或紫外分光法测定的。这个信息主要是在一些对肽的浓度很敏感的实验中,对计算肽的浓度是很重要的。

2.为什么有些多肽的合成产率或纯度会比较低?

       多肽合成与引子合成有比较大的区别,不能合成的引子很少,但是不能合成的多肽经常有。如Val,Ile,Tyr,Phe,Trp,Leu,Gln,和Thr这些氨基酸比邻或重复时,多肽链在合成过程中不能完全舒展溶解,合成效率下降。以下几种情形,合成效率和产物的纯度都比较低,如:重复Pro,Ser-Ser,重复Asp,4个连续Gly等。

3.如何保存合成的多肽? 

       多肽一般长期保存需要避光保存,并应保存在-20度,短期可以保存在4度。可以短时间以室温运输。多肽在-20℃很稳定,特别是冷冻干燥并保存在干燥器中,在将它们暴露于空气之前, 冷冻干燥多肽可以放于室温。这将是湿度影响减少,当无法冷冻干燥时,最好的方法是以小的工作样量存放。 

对于含Cys, Met orTrP的多肽,脱氧缓冲剂对其溶解必不可少,因为这种多肽可易空气氧化,在封瓶前,慢慢流过多肽的氮气或氩气也会降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解,与不含这些氨基酸的那些肽相比生命期有限。

4.如何从多肽序列中判定多肽的溶解性?

       (1) 多肽中如果含有高比例的疏水性很强的氨基酸如和Leu,Val,IIe,Met,Phe和Trp,多肽很难溶解与水性溶液中或根本不可能溶解。这些氨基酸无论是纯化或合成,都有可能有问题。

       (2) 一般情况下疏水性氨基酸的比例<50%,不能连续5个连续氨基酸为疏水性,带电荷的氨基酸的(正电荷K,R,H,N-terminus,负电荷D,E,C- terminus)的比例达到20%,在多肽的N或C短如果能增加极性氨基酸,也可以改善溶解性。

5.多肽的两端应如何处理?是保持自由状态还是屏蔽起来?

       多肽是用来模拟蛋白的,为了模仿蛋白的表现,我们需要合成与蛋白有相似的结构和电荷的多肽。当一条肽段从一个蛋白中“切出”之后,两端的电荷数将与基因体蛋白有差异。我们需要改变合成策略来使他们一致。 总体而言: 如果是出自蛋白C端的序列,通过乙酰化将N端屏蔽; 如果是出自蛋白N端的序列,通过酰胺化将C端屏蔽; 如果是出自蛋白中间部分,用乙酰化和酰胺化将两端都屏蔽。

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